लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे परिमाणवाचक विश्लेषणाची तत्त्वे आणि पद्धती

लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीची पृथक्करण यंत्रणा दोन टप्प्यांसाठी मिश्रणातील घटकांच्या आत्मीयतेतील फरकावर आधारित आहे.

वेगवेगळ्या स्थिर टप्प्यांनुसार, द्रव क्रोमॅटोग्राफी द्रव-घन क्रोमॅटोग्राफी, द्रव- द्रव क्रोमॅटोग्राफी आणि बॉन्डेड फेज क्रोमॅटोग्राफीमध्ये विभागली जाते.फिलर म्हणून सिलिका जेलसह द्रव-घन क्रोमॅटोग्राफी आणि मॅट्रिक्स म्हणून मायक्रोसिलिकासह बॉन्डेड फेज क्रोमॅटोग्राफीचा सर्वाधिक वापर केला जातो.

स्थिर टप्प्याच्या स्वरूपानुसार, लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी कॉलम क्रोमॅटोग्राफी, पेपर क्रोमॅटोग्राफी आणि पातळ थर क्रोमॅटोग्राफीमध्ये विभागली जाऊ शकते.शोषण क्षमतेनुसार, ते शोषण क्रोमॅटोग्राफी, विभाजन क्रोमॅटोग्राफी, आयन एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी आणि जेल पर्मीशन क्रोमॅटोग्राफीमध्ये विभागले जाऊ शकते.

अलिकडच्या वर्षांत, लिक्विड कॉलम क्रोमॅटोग्राफी सिस्टीममध्ये उच्च-दाब द्रव प्रवाह प्रणाली जोडली गेली आहे ज्यामुळे मोबाइल फेजचा प्रवाह उच्च दाबाखाली पृथक्करण प्रभाव सुधारण्यासाठी जलद गतीने प्रवाहित केला जातो, त्यामुळे उच्च-कार्यक्षमता (उच्च-दाब म्हणून देखील ओळखली जाते) द्रव क्रोमॅटोग्राफी उदयास आले आहे.

भाग
01 लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीच्या परिमाणात्मक विश्लेषणाचे तत्त्व

गुणात्मक आधारावर परिमाण करण्यासाठी, मानक म्हणून शुद्ध पदार्थ आवश्यक आहेत;

लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी प्रमाणीकरण ही तुलनेने परिमाणवाचक पद्धत आहे: म्हणजे, मिश्रणातील विश्लेषकाचे प्रमाण शुद्ध मानक नमुन्याच्या ज्ञात प्रमाणावरून अनुमानित केले जाते.

भाग
02 लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे प्रमाणीकरणासाठी आधार

मोजलेल्या घटकाचे प्रमाण (W) प्रतिसाद मूल्य (A) (शिखर उंची किंवा शिखर क्षेत्र), W=f×A च्या प्रमाणात आहे.

परिमाणवाचक सुधारणा घटक (f): हा परिमाणवाचक गणना सूत्राचा आनुपातिकता स्थिरांक आहे आणि त्याचा भौतिक अर्थ युनिट प्रतिसाद मूल्य (पीक क्षेत्र) द्वारे दर्शविलेल्या मोजलेल्या घटकाची रक्कम आहे.

परिमाणवाचक सुधारणा घटक मानक नमुन्याच्या ज्ञात रकमेतून आणि त्याच्या प्रतिसाद मूल्यावरून मिळू शकतो.

अज्ञात घटकाच्या प्रतिसाद मूल्याचे मोजमाप करा आणि घटकाची रक्कम परिमाणात्मक सुधारणा घटकाद्वारे मिळवता येते.

भाग
03 परिमाणवाचक विश्लेषणातील सामान्य संज्ञा

नमुना (नमुना): क्रोमॅटोग्राफिक विश्लेषणासाठी विश्लेषक असलेले समाधान.मानक आणि अज्ञात नमुन्यांमध्ये विभागलेले.

मानक: ज्ञात एकाग्रतेसह शुद्ध उत्पादन.अज्ञात नमुना (अज्ञात): ज्या मिश्रणाची एकाग्रता तपासली जाणार आहे.

नमुन्याचे वजन: चाचणीसाठी नमुन्याचे मूळ वजन.

सौम्यता: अज्ञात नमुन्याचा सौम्यता घटक.

घटक : क्रोमॅटोग्राफिक शिखर ज्याचे परिमाणवाचक विश्लेषण केले जाईल, म्हणजेच ज्याची सामग्री अज्ञात आहे असा विश्लेषक.

घटकाची रक्कम (रक्कम): चाचणी केली जाणारी पदार्थाची सामग्री (किंवा एकाग्रता).

अखंडता : संगणकाद्वारे क्रोमॅटोग्राफिक शिखराचे शिखर क्षेत्र मोजण्याची संगणकीय प्रक्रिया.

कॅलिब्रेशन वक्र: घटक सामग्रीचा एक रेषीय वक्र विरुद्ध प्रतिसाद मूल्य, मानक पदार्थाच्या ज्ञात प्रमाणापासून स्थापित, विश्लेषकची अज्ञात सामग्री निर्धारित करण्यासाठी वापरला जातो.

भाग
04 लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचे परिमाणात्मक विश्लेषण

1. परिमाणात्मक विश्लेषणासाठी योग्य असलेली क्रोमॅटोग्राफिक पद्धत निवडा:

l आढळलेल्या घटकाच्या शिखराची पुष्टी करा आणि 1.5 पेक्षा जास्त रिझोल्यूशन (R) प्राप्त करा

l चाचणी केलेल्या घटकांच्या क्रोमॅटोग्राफिक शिखरांची सुसंगतता (शुद्धता) निश्चित करा

l पद्धतीची शोध मर्यादा आणि परिमाण मर्यादा निश्चित करा;संवेदनशीलता आणि रेखीय श्रेणी

2. वेगवेगळ्या एकाग्रतेच्या मानक नमुन्यांसह कॅलिब्रेशन वक्र स्थापित करा

3. परिमाणात्मक पद्धतींची अचूकता आणि अचूकता तपासा

4. नमुना संकलन, डेटा प्रक्रिया आणि अहवाल परिणामांची अंमलबजावणी करण्यासाठी संबंधित क्रोमॅटोग्राफी व्यवस्थापन सॉफ्टवेअर वापरा

भाग
05 परिमाणात्मक शिखरांची ओळख (गुणात्मक)

गुणात्मकरीत्या प्रत्येक क्रोमॅटोग्राफिक शिखर ओळखा

प्रथम, क्रोमॅटोग्राफिक शिखराची परिमाण निश्चित करण्यासाठी प्रतिधारण वेळ (Rt) निर्धारित करण्यासाठी मानक नमुना वापरा.धारणा वेळेची तुलना करून, अज्ञात नमुन्यातील प्रत्येक क्रोमॅटोग्राफिक शिखराशी संबंधित घटक शोधा.क्रोमॅटोग्राफिक गुणात्मक पद्धत म्हणजे प्रतिधारण वेळेची मानक नमुन्याशी तुलना करणे.निकष अपुरापुढील पुष्टीकरण (गुणात्मक)

1. मानक जोडणी पद्धत

2. एकाच वेळी इतर पद्धती वापरा: इतर क्रोमॅटोग्राफिक पद्धती (यंत्रणा बदला, जसे की: भिन्न क्रोमॅटोग्राफिक स्तंभ वापरणे), इतर डिटेक्टर (PDA: स्पेक्ट्रम तुलना, स्पेक्ट्रम लायब्ररी शोध; MS: मास स्पेक्ट्रम विश्लेषण, स्पेक्ट्रम लायब्ररी शोध)

3. इतर साधने आणि पद्धती

भाग
06 परिमाणात्मक शिखर सुसंगततेची पुष्टी

क्रोमॅटोग्राफिक पीक सुसंगतता (शुद्धता) पुष्टी करा

प्रत्येक क्रोमॅटोग्राफिक शिखराखाली फक्त एकच मोजलेला घटक असल्याची खात्री करा

सह-इल्युटिंग पदार्थ (अशुद्धता) पासून हस्तक्षेप तपासा

क्रोमॅटोग्राफिक पीक सुसंगतता (शुद्धता) पुष्टी करण्याच्या पद्धती

फोटोडायोड मॅट्रिक्स (पीडीए) डिटेक्टरसह स्पेक्ट्रोग्रामची तुलना करणे

पीक शुद्धता ओळख

2996 शुद्धता कोन सिद्धांत

भाग 07 मध्ये सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या परिमाणात्मक पद्धती

मानक वक्र पद्धत, बाह्य मानक पद्धत आणि अंतर्गत मानक पद्धतीमध्ये विभागलेली:

1. बाह्य मानक पद्धत: लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीमध्ये सर्वाधिक वापरले जाते

प्रमाणित नमुने म्हणून तपासण्यासाठी संयुगांचे शुद्ध नमुने वापरून ज्ञात एकाग्रतेच्या मानक नमुन्यांची मालिका तयार केली गेली.स्तंभामध्ये त्याच्या प्रतिसाद मूल्यापर्यंत (पीक क्षेत्र) इंजेक्ट केले जाते.
एका विशिष्ट मर्यादेत, मानक नमुन्याची एकाग्रता आणि प्रतिसाद मूल्य, म्हणजे W= f×A , आणि एक मानक वक्र बनवलेला एक चांगला रेषीय संबंध आहे.

तंतोतंत त्याच प्रायोगिक परिस्थितीत, मोजल्या जाणार्‍या घटकाचे प्रतिसाद मूल्य प्राप्त करण्यासाठी अज्ञात नमुना इंजेक्ट करा.ज्ञात गुणांक f नुसार, मोजल्या जाणार्‍या घटकाची एकाग्रता मिळवता येते.

बाह्य मानक पद्धतीचे फायदे:साधे ऑपरेशन आणि गणना, ही सामान्यतः वापरली जाणारी परिमाणवाचक पद्धत आहे;प्रत्येक घटक शोधून काढण्याची गरज नाही;मानक नमुना आवश्यक आहे;मानक नमुना आणि अज्ञात नमुन्याची मोजमाप परिस्थिती सुसंगत असावी;इंजेक्शनची मात्रा अचूक असावी.

बाह्य मानक पद्धतीचे तोटे:प्रायोगिक परिस्थिती उच्च असणे आवश्यक आहे, जसे की डिटेक्टरची संवेदनशीलता, प्रवाह दर आणि मोबाइल टप्प्याची रचना बदलली जाऊ शकत नाही;प्रत्येक इंजेक्शनची मात्रा चांगली पुनरावृत्तीक्षमता असावी.

2. अंतर्गत मानक पद्धत: अचूक, परंतु त्रासदायक, मानक पद्धतींमध्ये सर्वाधिक वापरले जाते

मिश्रित मानक बनविण्यासाठी मानकांमध्ये आंतरिक मानकांची ज्ञात रक्कम जोडली जाते आणि ज्ञात एकाग्रतेच्या कार्य मानकांची मालिका तयार केली जाते.मिश्र मानकांमध्ये मानक ते अंतर्गत मानकांचे मोलर गुणोत्तर अपरिवर्तित राहते.क्रोमॅटोग्राफिक कॉलममध्ये इंजेक्ट करा आणि प्रतिसाद मूल्य म्हणून (मानक नमुना पीक क्षेत्र/अंतर्गत मानक नमुना पीक क्षेत्र) घ्या.प्रतिसाद मूल्य आणि वर्किंग स्टँडर्डच्या एकाग्रतेमधील रेषीय संबंधानुसार, म्हणजे W= f×A, एक मानक वक्र तयार केला जातो.

अज्ञात नमुन्यात अंतर्गत मानकांची ज्ञात रक्कम जोडली जाते आणि मोजल्या जाणार्‍या घटकाचे प्रतिसाद मूल्य प्राप्त करण्यासाठी स्तंभात इंजेक्ट केले जाते.ज्ञात गुणांक f नुसार, मोजल्या जाणार्‍या घटकाची एकाग्रता मिळवता येते.

अंतर्गत मानक पद्धतीची वैशिष्ट्ये:ऑपरेशन दरम्यान, नमुना आणि अंतर्गत मानक एकत्र मिसळले जातात आणि क्रोमॅटोग्राफिक स्तंभात इंजेक्ट केले जातात, म्हणून जोपर्यंत मिश्रित द्रावणातील अंतर्गत मानकांशी मोजलेल्या घटकाच्या प्रमाणाचे प्रमाण स्थिर असते, तोपर्यंत नमुना खंड बदलतो. परिमाणवाचक परिणामांवर परिणाम होणार नाही..अंतर्गत मानक पद्धत नमुना व्हॉल्यूम , आणि अगदी मोबाइल फेज आणि डिटेक्टरचा प्रभाव ऑफसेट करते, म्हणून ती बाह्य मानक पद्धतीपेक्षा अधिक अचूक आहे.

भाग
08 परिमाणवाचक विश्लेषण परिणामांवर परिणाम करणारे घटक

खराब अचूकता यामुळे होऊ शकते:

पीक एरियाचे चुकीचे एकत्रीकरण, नमुना तयार करताना नमुना विघटन किंवा अशुद्धता, नमुना कुपी सीलबंद न करणे, नमुना किंवा सॉल्व्हेंट वाष्पीकरण, चुकीचा नमुना तयार करणे, नमुना इंजेक्शन समस्या, चुकीची अंतर्गत मानक तयारी

खराब अचूकतेची संभाव्य कारणे:

चुकीचे पीक इंटिग्रेशन, इंजेक्शन किंवा इंजेक्टर समस्या, नमुना तयार करताना नमुना विघटन किंवा अशुद्धता, क्रोमॅटोग्राफिक समस्या, डिग्रेड डिटेक्टर प्रतिसाद